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本试剂盒可以从各种藻类中提取膜蛋白，包括蓝藻门的原核藻类和原生生物藻类。也可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组分，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。提取液裂解细胞的能力较温和，需要根据实际样本情况优化裂解时间。

本试剂盒提取的蛋白具有天然活性。本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫沉淀、酶活性测定等蛋白研究。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒，也可将最后样品除盐后用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

• 使用方便，从藻类中提取蛋白不需经过超声破碎等前处理。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
  
• 提取液A在使用前需一直置于2～8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
  
• 膜蛋白电泳时Loading buffer应该避免煮沸。
  
• 膜蛋白电泳时可以提高Loading bufer的SDS含量。

• 提取液制备：
  每500μL冷提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 提取液A在使用前需一直置于2～8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。
  
• 取洗净擦干的100～200mg藻类组织样本用手术剪刀尽可能剪碎。
  注：
  ● 如果是培养的单细胞藻类，也可洗涤离心后收集沉淀，直接进行下列步骤。
  
• 加入冷的500μL提取液A，用匀浆机/匀浆器充分匀浆。
  注：
  ● 也可以用液氮研磨处理后加入提取液A。
  ● 没有液氮研磨条件，也可直接加入冷的提取液A直接置冰上研磨处理。
  
• 将匀浆液吸入一个预冷的干净离心管中在2～8℃条件下振荡1～2小时。
  注：
  ● 此步骤必须2～8℃条件下进行。
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 如果没有2～8℃持续振荡条件，也可直接置2～8℃冰箱静置1～2小时，中间每隔10min用移液器吹打混匀。
  
• 将提取液在2～8℃低温下12000×g离心5分钟，取上清。
  
• 在37℃水浴10分钟。
  
• 在37℃ 1000×g离心3分钟。
  注：
  ● 此步骤必须37℃条件下离心。
  ● 如果离心机不可温控，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。
  
• 此时溶液分为2层，小心移除上层，留下管底部下层大约30～50μL液体。
  注：
  ● 下层为粘稠状液体。
  ● 含叶绿体的植物样本下层膜蛋白为黄绿色。通常不影响下游应用。
  
• 用50～150μL冷的膜蛋白溶解液B溶解下层溶液，即得膜蛋白样品。
  
• 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

• 蛋白浓度低？
  膜蛋白丰度低，需要尽可能加大细胞上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致担保浓度低，只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续震荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
  
• 提取的蛋白具有活性吗？
  本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。